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胚轴接种

导读

实践目的在上次实践基础上进一步学习愈伤组织培养的胚轴切割转接技术,加深对愈伤组织的理解。(二)实践地点和时间植物组培室、建议4学时(三)实践用具与材料超净工作台、手术剪、枪状镊、解剖刀或刀片、酒精灯、酒精瓶、纱布、高压灭菌锅、电子天平、盛物

   (一)实践目的    在上次实践基础上进一步学习愈伤组织培养的胚轴切割转接技术,加深对愈伤组织的理解。    (二)实践地点和时间    植物组培室、建议4学时    (三)实践用具与材料    超净工作台、手术剪、枪状镊、解剖刀或刀片、酒精灯、酒精瓶、纱布、高压灭菌锅、电子天平、盛物篮、记号笔。无菌播种已萌发青豆、无菌播种已萌发豌豆、大量元素、微量元素、维生素、铁盐、BA、2,4—D等母液。    (四)实践步骤    1、制备培养基    为试验观察生长物质对愈伤组织的影响,加深理解,可做对比试验,制备三种培养基    配方1MS+0.1ml/LBA+0.5ml/L2.4—D    配方2MS+0.5ml/LBA+0.1ml/L2.4—D    配方3MS    2、下胚轴的切割转接    (1)进行超净工作台开启紫外灯、风机,换鞋、穿工作服、清洁双手等常规操作。检查酒精灯、酒精瓶是否该加酒精。    (2)将上周无菌播种成活,已经萌芽的种子放入超净工作台,仔细观察种子,把污染的淘汰掉。    (3)灼烧镊子和解剖刀刀片,冷却,注意不能伤手。    (4)用工具将萌发种子放入培养皿内滤纸上,看清楚的胚轴位置,用镊子和解剖刀刀片等器械除去子叶和胚根,切割胚轴成5mm左右切段。    (5)将切割下来的胚轴移入新培养基内,做好标记,三种配方分别移入标记,放入培养室培养。    3、清洁整理    按常规清洁整理超净工作台和实验室,注意超净工作台不能用酒精擦拭,地面可用洗衣粉拖地,接种室可进行甲醛加高锰酸钾熏蒸,为以后的实验作准备。    (五)实训作业    写出本次实践报告,并写出自己的实践效果和体会    (六)评分标准    胚轴识别清楚,胚轴切割转接操作正确,愈伤组织分化成活高,污染小。

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